Zbiory Biblioteki Narodowej udostępniane są do celów naukowych, oświatowych, działalności kulturalnej i pracy zawodowej każdemu, kto ukończył 18 rok życia, w uzasadnionych przypadkach (na podstawie listu polecającego ze szkoły) ze zbiorów mogą korzystać uczniowie szkół ponadgimnazjalnych, przede wszystkim uczniowie klas maturalnych, uczestnicy olimpiad.
Ze względu na unikatowy charakter zbiorów Biblioteki ich niektóre kategorie - stare druki, rękopisy, materiały chronione i inne szczególnie cenne dokumenty - udostępniane są przede wszystkim do celów naukowych.
Ze zbiorów korzystać można wyłącznie w czytelniach. W Informatorium, katalogach głównych i centralnych czytelnicy mają dostęp do materiałów informacyjnych w postaci księgozbiorów podręcznych, informacyjnych baz danych, a także tradycyjnych zasobów informacji tworzonych przez Bibliotekę Narodową.
W Bibliotece działa 12 czytelń. W gmachu w al. Niepodległości 213 mieszczą się:
Korzystanie z katalogów głównych i centralnych oraz z materiałów informacyjnych w Informatorium nie wymaga odrębnej rejestracji. Natomiast czytelnik, który pragnie skorzystać ze zbiorów Biblioteki Narodowej w jednej z czytelń lub dostępu do Internetu w Informatorium, obowiązany jest zarejestrować się w gmachu w al. Niepodległości 213 w wyodrębnionym punkcie rejestracji czytelników, gdzie otrzymuje kartę czytelnika, a poza główną siedzibą bezpośrednio w Czytelni Zbiorów Specjalnych lub Czytelni Ikonograficznej.
W gmachu Biblioteki w al. Niepodległości funkcjonują dwa rodzaje kart, uprawniających do korzystania z czytelń, w Czytelni Kartograficznej obowiązuje osobny tryb rejestracji czytelników (szczegóły zob. Regulamin Czytelni Kartograficznej Biblioteki Narodowej):
Karta czytelnika jest wydawana na podstawie: dowodu osobistego, paszportu, ważnej legitymacji studenckiej lub szkolnej (wraz z listem polecającym ze szkoły), prawa jazdy. Cudzoziemcy rejestrowani są na podstawie paszportu, karty stałego pobytu, prawa jazdy. Rejestracja następuje po podpisaniu deklaracji przestrzegania Regulaminu. Aby uzyskać miejsce w wybranej czytelni, należy zdeponować w niej kartę czytelnika z fotografią lub kartę bez fotografii i ważny dokument identyfikacyjny ze zdjęciem.
Kartę czytelnik otrzymuje bezpłatnie. Karty nie wolno przekazywać innej osobie, a w przypadku jej zagubienia należy ten fakt zgłosić dyżurującemu w punkcie rejestracji bibliotekarzowi. Za wydanie duplikatu obowiązuje opłata w wysokości 10,00 zł.
W wyjątkowych okolicznościach 3 razy w ciągu dwóch lat czytelnik, posiadający stałą kartę, może otrzymać kartę jednorazową.
Po wygaśnięciu ważności karty obowiązuje ponowna procedura rejestracji.